【佳學基因檢測】讓基因檢測結果更加正確的竅門：MLPA的應用

MLPA代表Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification，是一種分子生物學技術，結合了引物探針依賴的PCR（Polymerase Chain Reaction）和多重探針靶向的特點。

MLPA的原理基于以下幾個步驟：

引物探針混合物的設計：MLPA使用兩種類型的DNA引物：探針和引導片段。探針包含用于特定序列的識別和連接的序列。引導片段有著共同的序列，用于PCR擴增和檢測。

樣品處理：樣品中的DNA首先被變性并且探針結合。如果樣品中存在目標序列，探針就會與之結合。

連接反應：連接酶被加入樣品中，它們識別并連接探針上的相鄰序列。

PCR擴增：引導片段啟動PCR擴增反應，放大連接的DNA序列。

分析：擴增產物經過分析，通常通過凝膠電泳或其他技術，以確定是否存在特定的DNA序列，并量化這些序列的數(shù)量。

MLPA的應用范圍廣泛，主要包括：

基因組結構變異的檢測：MLPA可用于檢測基因組中的拷貝數(shù)變異（CNV），這是一種導致遺傳疾病和癌癥等疾病的常見形式的基因變異。

遺傳疾病的診斷：MLPA可用于檢測單基因遺傳疾病，如囊性纖維化、地中海貧血等。

腫瘤診斷：MLPA可以幫助診斷腫瘤，并確定腫瘤細胞中的基因組變異，以指導治療方案。

遺傳多態(tài)性的研究：MLPA可用于研究人群中的遺傳多態(tài)性，例如檢測SNP（單核苷酸多態(tài)性）和基因座的等位基因。

總的來說，MLPA是一種高效、正確且靈活的技術，可用于研究和診斷多種遺傳性疾病和基因組變異。

MLPA探針

MLPA探針混合物中含有針對特定基因組序列的探針。一個MLPA探針由兩部分組成:左探針oligonucleotide(LPO)和右探針oligonucleotide(RPO)。LPO和RPO包含PCR引物和DNA雜交序列。RPO中額外的"填充"序列使每個探針具有獨特的長度。

樣本變性和探針雜交

先進步是純化樣本DNA并將其變性。然后與MLPA探針oligo過夜孵育。每個探針的LPO和RPO部分會與鄰接的目標DNA序列雜交。
 

探針連鎖

第二步是將雜交至鄰接目標序列的探針oligo進行連鎖。在連鎖位點附近不允許有任何不配對的情況,這使連鎖反應高度特異。探針連鎖產物的數(shù)量反映了樣本中目標序列的數(shù)量。

探針擴增

第三步是使用單一通用引物對連鎖的探針進行多重PCR擴增。只有連鎖的探針才會指數(shù)級擴增,因此無需去除未結合和未連鎖的探針。

片段分離

第四步是使用毛細管電泳對片段進行分離。PCR產物被加載到毛細管電泳儀上,按長度分離。每個片段對應一個特定的MLPA探針。

數(shù)據分析

賊后一步是使用基因解碼軟件進行數(shù)據分析。通過將測試樣本中參考探針和目標探針的相對峰高與已知正?？截悢?shù)的參考樣本進行比較,來確定相對拷貝數(shù)。先進的質量檢查有助于識別不高效的數(shù)據。